禽流感病毒通用型RT-LAMP检测试剂盒

1.产品编号：LR002
2.产品规格：25次
3.中文名：禽流感病毒通用型RT-LAMP检测试剂盒
4.适用范围：
针对禽流感病毒NA基因设计特异性LAMP扩增引物，适用于禽咽喉拭子、泄殖腔拭子、冷冻禽肉组织渗出液、鸡胚尿囊液等样本中禽流感病毒的检测。
5.组成及保存条件：

6.使用方法：

使用时，取18.6µL通用型 RT-LAMP 反应液，加入模板、LAMP、DNA 聚合酶、反转录酶，并加入无核酸酶H2O补足25µL即可进行反应。
7.反应举例：

1. 制备RNA模板：可使用商业化试剂盒提取RNA。试剂盒内的阳性对照须与标本一起处理。
2. 制备反应液： 融解通用型 RT-LAMP反应液，混匀，短暂离心。在反应管中加入以下组分：

如在反应管中加入SYBR Green Ⅰ1µL，可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。

3.等温扩增：混匀，置于60℃保温30～90min，80℃ 10min灭活LAMP DNA聚合酶，产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。

4.扩增产物的检测：向扩增管中直接加入1µL的显色剂，混匀，观察颜色的变化，阳性样品变呈浅绿色，阴性样品仍为橙色。

另外，还有以下几种常用的检测方法：

1. 琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5µL，1～2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。
2. 荧光定量PCR检测。
3. 根据反应生成的焦磷酸镁沉淀，直接用肉眼进行检测判断。

8.注意事项：
1）首次融解后轻轻混匀，然后适量分装，于-20℃保存，以避免多次反复冻融及造成污染。
2）LAMP扩增具有特异性强、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳
性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUNG（可能导致反应效率下降）、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换。
3）反应管冷却至室温后开盖加入显色剂观察结果能有效避免反应产物外逸，建议反应结束后置室温冷却。
4）严防操作环境、使用的容器耗材和试剂的RNase污染，所用器具与耗材需进行无RNase处理，操作过程中勤换手套。
5）本产品仅供科研使用。

9.保存条件：
所有试剂-20℃保存。
10.有效期：
12个月
11.技术支持信息：
如有任何问题或欲索取更多产品信息，请Email至support.smartshining@gmail.com；或拨打电话：0755-33019267。