食品安全检测试剂产品简介深圳博睿祥晖生物技术有限公司

手足口病实时荧光RT-PCR检测试剂盒

1. 产品编号：HF001
2. 产品规格：25次/盒
3. 试剂盒简介：
手足口病（Hand-foot-mouth Disease, HFMD）是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要症状。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。
祥晖生物针对常见的致手足口病肠道病毒设计了肠道病毒通用型、EV71特异型和CVA16特异型三套引物探针，能够快速、准确地对肠道病毒RNA进行检测，为诊断提供参考依据。
4. 组成及保存条件：

编号	试剂盒组成	规格	保存条件
1	Negative control	80μL×1管	-20℃
2	Positive control	80μL×1管	-20℃
3	2×qRT-PCR mix（A/B/C）※	950μL×3管	-20℃
4	Taqman probes（A/B/C）（10μM）※	40μL×3管	避光-20℃
5	Reverse transcriptase	80μL×1管	-20℃
6	Taq polymerase（2.5U/μL）	230μL×1管	-20℃
7	Nuclease-free ddH2O	1mL×2管	-20℃

注意：2×qRT-PCR mix分为A/B/C三管，与Taqman probes的A/B/C三管对应。另2×qRT-PCR mix内含有ROX reference dye

A代表肠道病毒通用型；B代表肠道病毒EV71；C代表柯萨奇病毒CVA16

5. 适用仪器：
ABI系列、MJ系列、Bio-Rad，Roche系列等荧光定量PCR仪。
6. 使用方法：

反应体系的配制

请参照下表配制RT-PCR反应体系：

2×qRT-PCR mix A/B/C	12.5μL
Positive control /negative control /待检测病毒RNA	1μL
Taqman probes A/B/C	0.5μL
Reverse transcriptase	0.35μL
Taq polymerase	1μL
Nuclease-free ddH2O	9.65μL
总体积	25μL

待测病毒RNA的实际用量可根据模板浓度自行调整，建议使用10pg～100ng的RNA为模板。

2.反应程序的设置

程序设置时选择FAM信号，参比荧光选择ROX。
推荐反应程序：
50℃   30min；
92℃    3min；
92℃    15s，55℃   30s（荧光收集），68℃   20s，40 cycles。

3.结果判断以ABI7300系统为例：
a）选用自动Ct分析，Positive control的Ct值应≤30.0，同时有较好的扩增曲线；Negative control的Ct值应无或≥35.0，并且无明显
扩增曲线。否则，此次实验视为无效。
b）检测样本Ct值≤35.0并有扩增曲线，可判为阳性结果。
c）检测样本Ct值＞35.0，无明显扩增曲线判为阴性；如有明显扩增曲线，建议重做，重做结果如一致，可判为阳性。

7. 注意事项：
1）Taqman probes注意避光，建议使用锡箔纸包裹。
2）冻结试剂融解后请上下颠倒轻轻均匀混合，避免振荡器等剧烈搅拌。混匀制品后请用离心机瞬时离心，使液体集中在离心管底部。
3）尽量避免多次反复冻融，如果需要多次使用时，请在第一次融解后将Master mix按适当量分装后保存。
4）为防止待检测的病毒RNA被RNA酶降解，在配制反应体系请一定使用经DEPC水处理的枪头、Microtube等，同时注意避免交叉污染。

5）本产品仅供科研使用。
8. 有效期：6个月
9. 技术支持信息：
如有任何问题或欲索取更多产品信息，请Email至support.smartshining@gmail.com；或拨打电话：0755-33019267。