通用型LAMP反应液试剂盒使用说明书

1.产品编号：L0001
2.产品规格：48次
3.中文名：通用型LAMP反应液试剂盒
4.技术背景：
环介导等温扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）是一种新型的核酸扩增技术。反应的过程主要分为循环扩增反应起始物的形成和循环扩增反应。其基本原理是采用4/6条特异引物和具有链置换功能的DNA聚合酶，在65℃左右对核酸进行等温扩增。目前，该技术已经应用于人类及动植物细菌、真菌、寄生虫、病毒等病原体的快速检测。LAMP技术具有下面的优点：
1）在恒温的条件下实现核酸的扩增，不需要热循环仪；
2）特异性高，采用4/6条特异引物识别目的基因上的6/8个区域；
3）扩增速度快，效率高，可在30-60min内获得结果；
4）结果判定简单，无需电泳就可以实现肉眼可见的扩增效果。
5.适用范围：
可用于一切与LAMP相关的快速DNA等温扩增技术。
6.组成及保存条件：

7.使用方法：
使用时，取适量2×LAMP Mix溶液，加入引物、模板、LAMP DNA Polymerase，并加入H2O补足体积，使LAMP Mix的终浓度为1×即可进行反应。
8.反应举例：
注意：以下举例多数情况下可供参考。实际反应条件因模板、引物等的不同而有所差异，应根据实际情况，设定最佳反应条件。

◆制备反应液：

融解2×LAMP Mix，混匀，短暂离心。在反应管中加入以下组分：

如在反应管中加入SYBR Green Ⅰ1µL，可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。

◆等温扩增：

混匀，置于60～65℃保温30～90min，80℃ 10min灭活LAMP DNA Polymerase，产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。

◆扩增产物的检测：

向扩增管中直接加入1µL的Color Developing Reagent，混匀，观察颜色的变化，阳性样品变呈浅绿色，阴性样品仍为橙色。
另外，还有以下几种常用的检测方法：

●琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5µL，1～2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。

●荧光定量PCR检测。

●根据反应生成的焦磷酸镁沉淀，直接用肉眼进行检测判断。

9.注意事项：
1）首次融解后轻轻混匀，然后适量分装，于-20℃保存，以避免多次反复冻融及造成污染。
2）引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。引物至少包括F3/B3和FIP/BIP,加入环状引物Floop/Bloop
可以使反应速度大大提高。应优化引物序列，GC含量和尽量避免二级结构。反应中各个引物的浓度及比例对扩增的效果有一定的影响。
3）LAMP扩增具有特异性强、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUNG（可能导致反应效率下降）、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换。
10.保存条件：
所有试剂-20℃保存。
11.有效期：
12个月
12.技术支持信息：
如有任何问题或欲索取更多产品信息，请Email至support.smartshining@gmail.com或support@smartshining.com；或拨打电话：0755-33019267。