Long Amp SuperTaq DNA 聚合酶

长片段高GC模板扩增

简介：

• SuperTaq DNA Polymerase专门为长模板DNA PCR扩增而设计。SuperTaq DNA聚合酶是由修饰过的Taq DNA聚合酶（简称TAQm）和天然的高保真Pfu DNA聚合酶按一定比例配制的混合物。与天然的Taq DNA聚合酶相比，TAQm的保真性有所提高，而DNA聚合能力保持不变; 体系中由于混有Pfu DNA聚合酶, 它具有3'-5'端外切酶活性，能纠正DNA扩增时产生的部分错误。针对长链大片段DNA扩增的特点，SuperTaq 大片段扩增 PCR系统提供三个组成显著不同的反应缓冲液，能比较快的确定最佳的反应条件。

浓度：

• 2.5 -5 u / ml

10×PCR 反应缓冲液：

• Buffer  I   10× conc w/ 18 mM Mg2+
• Buffer  II  10× conc w/ 23 mM Mg2+
• Buffer  III  10× conc w/ 23 mM Mg2+and Enhancer

质量控制：

• 经过检测无外源核酸酶活性；SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无外源DNA; 能从100ng lambda 模板中扩增出1kb，2.2kb 和7kb的单拷贝基因。

储存条件：

• SuperTaq 成品保存于50 mM Tris-HCl, pH8.2, 0.1 mM EDTA, 0.1% Tween 20,  0.1% NP-40, 1 mM DTT 和50% glycerol，-20°C,一年以上。

主要技术参数：

• Taq DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌Thermus aquaticus, 分子量为94KD。Pfu DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌Pyrococcus furiosis，分子量为90KD；PCR产物为 3’端带有单个dA； DNA聚合时的延伸速度为每分钟1000碱基左右；最佳温度65-72℃；dNTP的工作浓度为100-500mM，工作pH为8.1-9.2；供应浓度为2.5-5U/ml；-20℃保存至少一年。

使用方法：

• 按下表中所列次序在冰上在0.2或0.5ml超薄PCR管中混合有关试剂

注意：Buffer III在使用前要恢复到室温，充分混匀后吸取。

• 混匀后，加入30ml矿物油；
• 按下表的条件立即进行PCR。

注意事项：

• 退火温度取决与引物的Tm值，在65°C左右为最佳。如果实际使用引物的Tm值达不到65°C, Tm值设定在计算值。
• DNA合成的温度68°C为最佳，以最大限度保证SuperTaq的活性。
• 对于长链DNA片段的扩增，摸板的质量常常是决定实验成败的关键，使用纯度高，片段完整的DNA模板。
• 对于难度大的扩增，不管DNA片段的长度如何，首先使用Buffer III。
• SuperTaq体系中的Pfu DNA聚合酶具有3'-5'端外切酶活性，会部分降解引物，因此要求准备反应时最后加入SuperTaq，迅速进行反应。
• 引物设计时要避免自身形成二级结构和引物二聚体，长度为24-34个碱基，使引物的Tm值在63-68°C之间。目的是提高反应的特异性，降低短的非特异性产物的形成。引物必须是PAGE纯化的。
• 模板变性时，除了GC含量很高的模板外，92°C 30秒已足够。模板长时间处于高温环境，将会发生去嘌呤和部分降解。
• 本系统提供的缓冲中都含有Mg2+，如果扩增不理想，可将Mg2+在原有浓度的基础上再提高0.25mM。