Taq Plus DNA Polymerse E2300/E2301/E2302

长片段扩增

简介：

• Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶按特定比例混合而成。Taq Plus DNA聚合酶具有Taq DNA聚合酶很强的DNA聚合能力，同时由于Pfu DNA的存在，具有一定的保真特性, 能部分纠正DNA扩增过程中所出现的错误。保真性约为Taq酶的２倍(注意某公司宣称Taq Plus保真性比Taq DNA聚合酶高10倍以上是没有科学根据的)。对于高保真扩增，请选用BBST生产的真正的高保真DNA聚合酶，Pfu DNA 聚合酶 (产品编号E2000)。

浓度：

• 2.5 -5 U / ml

活性定义：

• 1单位Taq定义为在72℃ 30分钟内将10nmol 同位素标记的4×dNTP掺入到DE81纸不溶物质中所需Taq的量。

反应缓冲液:

• 10×PCR buffer (Mg free): 100 mM KCl, 80 mM (NH4)2SO4,100 mM Tris-HCl, pH9.0, 0.5% NP-40。
• 25 mM MgCl2。
• 10×PCR buffer (w/ Mg):  20 mM MgSO4, 100 mM KCl, 80 mM (NH4)2SO4,100 mM Tris-HCl, pH9.0, 0.5% NP-40。

质量控制：

• 经过检测无外源核酸酶活性；SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无外源DNA; 能从50ng lambda 模板中特异性扩增出1kb 和2.2kb和７kb 的单拷贝基因。

储存条件：

• Taq 成品保存于50 mM Tris-HCl, pH8.2, 0.1 mM EDTA, 0.1% Tween 20, 0.1% NP-40, 1mM DTT 和50% glycerol，-20°C,一年以上。

主要应用：

• PCR方法扩增基因。
• 对DNA 片段进行放射性同位素，生物素等标记。
• 用于构建PCR诊断试剂盒。
• 基因T-A 克隆。

主要技术参数：

• Taq DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌Thermus aquaticus, 分子量为94KD。Pfu DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌Pyrococcus furiosis，分子量为90KD；PCR产物为 3’端带有单个dA； DNA聚合时的延伸速度为每分钟1000碱基左右, 最佳温度65-75℃；dNTP的工作浓度为100-300mM, 最佳Mg2+浓度为 1.5-3.0mM, 最佳pH为8.1-9.2；供应浓度为2.5-5U/ml; -20℃保存至少一年。

使用方法：

• DNA扩增（PCR）时，50ml标准反应体系需Taq Plus DNA聚合酶2.5 U，模板10ng-500ng，其它参数设定参照主要技术参数。

注意事项：

• 除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：(1) 模板太多或太少 （2）样品中存在Mg2+ 络合剂, 导致Mg2+实际浓度过低 (3) PCR仪温度不准 (4) 临床来源的样品中含有未知的Taq酶抑制剂 (5) 引物部分降解 (6) dNTP部分降解 (7)酶用量太大等。