Blue-Pfu DNA Polymerse E2100B

简介：

• Blue-Taq由Taq DNA polymerase和Blue Dye及扩增助剂等组成。亮丽的色彩Blue, 非常易于区分是否已经加入Taq酶。同时还有一个特点是反应体系可以直接加样，无须Loading Buffer。Taq DNA聚合酶从5'-3'端合成DNA，具有很强的DNA聚合能力，其DNA延伸的速度是已知高温嗜热DNA聚合酶中最高的。Taq DNA聚合酶无3'-5'端外切酶活性, DNA扩增时没有校正功能。

浓度：

• 1 U / ul

活性定义：

• 1单位Taq定义为在72℃ 30分钟内将10nmol 同位素标记的4× dNTP掺入到DE81纸不溶物质中所需Taq的量。

反应缓冲液:

• 10×PCR buffer (w/ Mg):  20 mM MgSO4, 100 mM KCl, 80 mM (NH4)2SO4,100 mM Tris-HCl, pH9.0, 0.5% NP-40。

质量控制：

• 经过检测无外源核酸酶活性；SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无外源DNA; 能从50ng lambda 模板中特异性扩增出1kb 和2.2kb 的单拷贝基因。

主要应用：

• PCR方法扩增基因。
• 对DNA 片段进行放射性同位素，生物素等标记。
• 用于构建PCR诊断试剂盒。
• 基因T-A 克隆。

主要技术参数：

• Taq DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌Thermus aquaticus。分子量为94KD；PCR产物为 3’端带有单个dA； DNA聚合时的延伸速度为每分钟1200个碱基以上, 最佳温度65-75℃；dNTP的工作浓度为100-300mM, 最佳Mg2+浓度为 1.5-3.0 mM, 最佳pH为8.1-9.2；供应浓度为2.5-5U/ml；-20℃保存至少一年。

使用方法：

• DNA扩增（PCR）时，50ml标准反应体系需Taq DNA聚合酶2.5 U，模板10ng-500ng，其它参数设定参照Taq主要技术参数。反应开始前，需要混匀，让Blue均匀分布。 PCR反应结束后，Agarose电泳，直接加样分析。

注意事项：

• 除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：(1) 模板太多或太少 （2）样品中存在Mg2+ 络合剂, 导致Mg2+实际浓度过低 (3) PCR仪温度不准 (4) 临床来源的样品中含有未知的Taq酶抑制剂 (5) 引物部分降解 (6) dNTP部分降解 (7) Taq酶用量太大等。