简介：

• Red Pfu由Pfu DNA polymerase和Red Dye及扩增助剂等组成。亮丽的色彩Red, 非常易于区分是否已经加入Pfu酶。同时还有一个特点是反应体系可以直接加样，无须Loading Buffer。Taq DNA聚合酶从5'-3'端合成DNA，具有很强的DNA聚合能力，其DNA延伸的速度是已知高温嗜热DNA聚合酶中最高的。Pfu DNA聚合酶和3'-5'端外切酶活性, DNA扩增时具有校正功能。

浓度：

•  1 U / ul

活性定义：

•  1单位Pfu定义为在72℃ 30分钟内将10nmol 同位素标记的4× dNTP掺入到DE81纸不溶物质中所需Pfu的量。

反应缓冲液:

•  10×PCR buffer (w/ Mg):  20 mM MgSO4, 100 mM KCl, 80 mM (NH4)2SO4,100 mM Tris-HCl, pH9.0, 0.5% NP-40。

质量控制：

• 经过检测无外源核酸酶活性；SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无外源DNA; 能从50ng lambda 模板中特异性扩增出1kb 和2.2kb 的单拷贝基因。

主要应用：

• PCR方法扩增基因
• 对DNA 片段进行放射性同位素，生物素等标记。

主要技术参数：

• Pfu DNA 聚合酶来源于高温嗜热菌Pyrococcus furiosis。分子量为90KD；PCR产物为平端，无单个A,有3-5外切酶活性， DNA聚合时的延伸速度为每分钟600bp左右，最佳Mg2+浓度为 2-3.0 mM, 最佳pH为8.1-9.2；供应浓度为1U/ml；-20℃保存至少一年。

使用方法：

• DNA扩增（PCR）时，50ml标准反应体系需Pfu DNA聚合酶2.5 U，模板10ng-500ng，其它参数设定参照Pfu主要技术参数。反应开始前，需要混匀，让Red均匀分布。PCR反应结束后，Agarose电泳，直接加样分析。

注意事项：

• 除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：(1) 模板太多或太少 （2）样品中存在Mg2+ 络合剂, 导致Mg2+实际浓度过低 (3) PCR仪温度不准 (4) 临床来源的样品中含有未知的Pfu酶抑制剂 (5) 引物过短或部分降解 (6) dNTP部分降解 （7）PCR产物需要平端连接。