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3S柱离心式血液DNA抽提试剂盒 K981/982

3S DNA Isolation Kit for Blood and Cells V3.0

CAT#	SIZE	PRICE（￥）
K981	50次	480
K982	100次	900

试剂盒组成：

Components and Size	K981 (50 次)	K982 (100 次)	K983 (250 次)
3S Column 2.0 ml Coll Tube RBC Lysis Buffer Solution WBS I Solution WBS II Wash Solution TE Protocol	50根 50只 75ml 22 ml 16 ml 22ml 10 ml 1份	100根 100只 150ml 45 ml 32 ml 3x22ml 10 ml 1份	250根 250只 5x75ml 130 ml 80 ml 6x 22ml 20 ml 1份

注：
(a)首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加50ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。
(b) TE pH8.0或者水均可以用于洗脱，但是用水洗脱的洗脱效率通常要低一些。
(c) 3S柱DNA结合能力大于20ug。
(d) 本试剂盒提供的RBC Lysis Buffer(红细胞裂解缓冲液)可以用于50次0.5ml全血的处理。
主要用途：
(1)从全血中抽提总DNA (包括血液中病毒，Gram阴性细菌等).
(2)从培养的真核细胞（酵母除外）抽提总DNA。
DNA抽提方法：
1．样品处理：

a．血液：血液须抗凝。由于红细胞和血小板不含细胞核，血液中的基因组DNA主要来自于白细胞和血液中的病毒等。如果血液的体积小于200ul,直接执行步骤2；如果血液的体积大于200ul,按下法处理：每1ml血液用3ml RBC Lysis Buffer,混匀，室温放置10分钟；然后2500×g，离心5分钟。用200µl TE 将白细胞悬浮起来，然后执行步骤2操作。
b．细胞样品：I. 悬浮培养动物和植物细胞：1500´g室温离心5分钟，彻底去上清，细胞用加入200ul TE悬浮，加入 400ul Digestion Buffer和3ul Proteinase K,混匀 55C保温10分钟。II. 贴壁培养细胞：倒掉培养基，用PBS洗涤细胞，然后用胰蛋白酶消化细胞。当细胞从培养瓶表面脱落以后，将细胞转移到离心管中，1500´g离心5分钟，彻底去上清; 细胞用200ul TE悬浮起来，执行步骤2。
c．生物体液：将体液转移到离心管中，根据体液的性质，确定体液的用量。如果体液的体积小于200µl，可以直接使用; 5000×g, 室温离心10分钟; 小心移走上清，沉淀用200µl TE悬浮，执行步骤2。
d．尿液：将尿液转移到离心管中，5000×g, 室温离心10分钟；小心移走上清，沉淀用200µl TE悬浮，执行步骤2。
2．按样品制备方法制备的200µl 样品中，加入400µl Solution WBS I和100ul异丙醇，混匀。将样品全部转移到3S柱，柱子放入2.0 ml Collection Tube，可以让离心管盖开着(盖子盖上也可以)，室温放置2分钟以上。转移时用1ml Tip头取样品。

3．用台式离心机，10,000转/分，室温离心1分钟。
4．取下3S柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一根离心管中，加入300µl Solution WBS II, 10,000转/分，室温离心1分钟（该步骤有时可以省去）。
5．取下3S柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一根离心管中，加入600µl Wash Solution, 10,000转/分，室温离心1分钟。
6．重复步骤5一次。
7．取下3S柱，弃去离心管中的全部废液。将柱子放回同一根离心管中，10,000转/分，室温离心２分钟，以除去残留的Wash Solution。
8．在柱子中央加入50µl TE, 将柱子放入新的干净1.5 ml离心管中，不盖离心管盖，室温放置２分钟。10,000转/分，室温离心1分钟。收集管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可以4°C或-20°C保存。注意：为提高洗脱效率，可以将TE 预热到37-55°C。如果样品中基因组DNA含量很低，用30µl Elution Buffer洗脱可以提高洗脱液的样品浓度，但产率有所下降。

9．用分光光度计测量DNA含量按1OD260=50µg基因组DNA，或者走0.8% Agarose 胶判定DNA的完整性，也可以判定样品中是否有RNA。