生物素检测试剂盒
Biotin Detection Kit

产品编号：K806
规格：检测10次100平方厘米的转移膜
适用范围：探针为生物素标记的Southern 和Northern Blot 或原位杂交。

试剂盒组成：

说明：
(1) NBT和BCIP -20C保存，稳定期一年以上。不推荐将两者混合或与AP Substrate Buffer混合存放。
(2) Anti Biotin Antibody Alkaline Phosphatase Conjugate, 5mg/ml, 可以用于多Western, ELISA, Dot，IH，核酸杂交等，滴度范围为1：100-30,000，需要根据用途和经验判定最佳的稀释范围。对于用于核酸标记的探针检测，建议稀释度在1：2500-5000左右。
(3) 本试剂盒提供的是用于Southern / Northern / Western 杂交所需要的杂交液,提供的方法为Southern/Northern杂交方法。
(4) 需要准备的材料还有20X SSC,杂交用品等
使用案例
注意：步骤1-8提供的方法供参考，所牵涉到的试剂和用品都需要由用户自行准备，本试剂盒提供的试剂用于步骤9以后的检测过程
1. 按要求准备和处理好Biotin (生物素)标记的探针
2. 按要求获得含检测目的基因的转移膜，本案例以10cm x10cm的转移膜为例。
3. 用6x SSC湿润经过固定（UV或高温80度固定）转移膜。

杂交液使用前需要68度预热，混匀后转移。
5. 生物素标记的探针95度左右变性5分钟，放置冰里或直接转移到杂交管（袋）中，68度杂交过夜。
6. 倒掉杂交液（注意也可以回收重复使用，使用次数根据本次杂交的效果判定），加入20ml 左右的2X SSC/0.1%SDS，室温洗涤5分钟；重复洗一次。
7. 倒掉洗膜液，加入20ml 左右的0.2X SSC/0.1%SDS，室温洗涤5分钟；重复洗一次。
8. 倒掉洗膜液，加入20ml 左右的0.2X SSC/0.1%SDS，68度洗涤15分钟；重复洗一次。
9. 倒掉洗膜液, 下面的检测过程可以在合适大小的培养皿，杂交瓶，杂交袋中进行。加入10ml 左右Wash Solution, 室温洗涤5分钟。
10. 倒掉Wash Solution，加入10ml Blocking Solution, 室温保温30分钟。
11. 取10ml Blocking Solution,加入2-4ul Anti Biotin Antibody Alkaline Phosphatase Conjugate, 室温保温60分钟。
12. 倒掉或回收含抗体的Blocking Solution。
13. 加入20ml Wash Solution，室温洗15分钟，重复洗一次。
14. 倒掉Wash Solution，加入10ml AP Substrate Solution室温洗2-5分钟。
15. 配制AP底物，取10ml AP Substrate Solution加入100ul NBT Stock Solution 和100ul BCIP Stock Solution混匀。