革兰氏阳性细菌柱离心式基因组DNA小量抽提试剂盒 K713P/714P

3S Spin Genomic DNA Miniprep Kit  for Gram Positive Bacterial  K713P

试剂盒组成：

注：
(a)首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入50ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量

基本原理：
       该试剂盒的核心是能特异吸附DNA的3S柱。3S柱是一种能放入普通1.5ml和2.0ml eppendorf管中的离心式小柱，柱子的底部有惰性大分子材料，它能由选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。制备基因组DNA时，首先根据要求准备样品，后用Protease K和去污剂裂解组织和细胞，释放出基因组DNA。3S用于吸附基因组DNA, 经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用Elution Buffer, TE 或者水洗脱。
主要用途：
从Gram阳性细菌小规模快速抽提基因组DNA。
主要特点：
1.无需酚和氯仿抽提，无需乙醇沉淀，安全。

基因组DNA抽提方法
1．样品准备：
培养细菌细胞的处理
（1）本试剂盒单次处理量为107，过夜培养的细菌准备200µl，12000转/分钟，离心2分钟。彻底移走上清液，细胞用150µl TE悬浮起来。对于非培养细菌，需要用合适的方式得到细菌。
（2）溶菌酶处理：加入10ul Lysozyme HC，混匀室温放置20分钟。
u 如果样品不能马上用于抽提基因组DNA, 可以-20 oC保存备用。
u 样品不能反复冻融，否则基因组DNA的完整性（长度）和产率都会受到影响。
u 样品不要太多，否则基因组DNA的纯度和产率反而下降。

２．在按要求处理的样品中加入500ul Digestion Buffer混匀后，加入3ul Protease K，混匀，55°C保温10-60分钟。
注意：不得将Protease K先加入到Digestion Solution，再加到样品中。

３．高速室温12000转/分离心5分钟， 将上清转移到1.5ml无菌离心管中，加入300ul Solution B, 混匀。
４．将样品全部转移到3S柱，柱子放入2.0 ml Collection Tube，。转移时用1ml Tip头取样品。
５．用台式离心机，12,000转/分，室温离心1分钟。
６．取下3S柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一根离心管中，加入500µl Wash Solution, 12,000转/分，室温离心1分钟。重复该步骤一次。
７．取下3S柱，弃去离心管中的全部废液。将柱子放回同一根离心管中，10,000转/分，室温离心２分钟，以除去残留的Wash Solution。
８．在柱子中央加入100µl TE, 将柱子放入新的干净1.5 ml或２.0ml离心管中，室温或37-55°C放置２分钟。12,000转/分，室温离心1分钟。收集管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可以4°C或-20°C保存。

注意：
1）为提高洗脱效率，可以将TE预热到37-55°C。
2）如果样品中基因组DNA含量很低，用30µl TE洗脱可以提高洗脱液的样品浓度，但产率有所下降。重复步骤8，可以提高产率20%。