代理产品深圳博睿祥晖生物技术有限公司

DNA补平试剂盒 K571/572

CAT#	SIZE	PRICE（￥）
K571	20	480
K572	50	1000

试剂盒组成：

Material Provided	K571 (20次)	K572 (50次)
T4 DNA Polymerase 5X Blunting Buffer (with 4x dNTP) Dilution Solution BSA (0.1%) dd H2O Protocol	80 UNITS 200 ml 500 ml 1000 ml 1000 ml One	200 UNITS 500 ml 1000 ml 1000 ml 1000 ml One

注意：所有试剂必须注意：所有试剂必须在-20℃保存。

简介：DNA Blunting Kit是利用T4 DNA Polymerase 5’-3’的DNA聚合性能和酶本身所具有的3’-5’外切酶活性使DNA片段平端化. 平端化反应时, 通常需要的dNTP的存在, 保证T4 DNA聚合酶的作用仅仅局限于DNA片段的两端。本试剂盒Blunting Buffer中含有优化浓度的4x dNTP, 反应时再无须添加dNTP。本试剂盒适用于有突出末端(3’端和/或5’端)任何形式的DNA片段。当5’末端突出时, T4 DNA Polymerase 5’-3’的DNA聚合特性补平(合成)3’端凹陷部分碱基；当3’末端突出时, T4 DNA Polymerase 3’-5’的外切酶活性切除3’端突出的碱基，所以对于末端性质不清楚的DNA片段均可用该试剂盒将末端补平。注意：超声波产生的DNA片段不能用该试剂盒补平。

实验操作：
1．准备DNA模板（具有突出末端的DNA片段），DNA模板液体总量不大于13ml，加入4ml 5X Blunting Buffer, 2ml 0.1% BSA。
注意：
（1）本反应体系处理DNA的量为100ng- 5mg （一般为0.1-5pmol）。最佳量：1-2 mg。（2）如果要求获得最佳的反应效果，DNA模板需要用合适的方法纯化，如使用博彩公司生产的K151或K141纯化试剂盒，用水或 Dilution Solution溶解。

（3）如果平端化的目的是为了准备平端克隆所需要的的DNA样品，酶切反应DNA样品可以按下法处理：70C保温处理10分钟,　离心将溶液收集到管底，加入２倍体积的无菌水稀释，Blunting反应总体积按酶切反应体积的４倍计算，按比例加入Blunting Buffer, BSA和T4 DNA Polymerase。根据我们的经验，一般能达到满意的结果。

（4）该试剂盒可以用于除去PCR产物末端单个碱基A. 使用非磷酸化引物扩增的PCR产物，需要用T4 PNK磷酸化后方可以和非磷酸化的载体连接。
2．70C保温处理5分钟（目的是防止DNA末端可能存在的退火），将样品转移到37C恒温水浴中，2分钟（目的是使反应液平衡到37C）。
3．加入1ml T4 DNA Polymerase (4U), 用Tip轻轻搅动混匀。
4．37C保温5分钟。注意：反应也可采用比较温和的温度12-25C, 反应时间为15分钟。
5．70C保温处理10分钟。注意：如反应不能立即终止，将反应管转移到冰里。
6．DNA平端化后用于下游的分子操作或长期低温保存，通常情况下需要除去反应体系中的T4 DNA Polymerase。简单和快捷的方法是使用博彩公司生产的K151或K141纯化试剂盒，也可以采用酚抽提和乙醇沉淀的方法。沉淀后的产物用10ml DNA Dilution Solution或TE或水溶解,-20C保存备用。