增强型Lowry法蛋白质定量测定试剂盒 K5000/5001/5002

Lowry Protein Quantitation Reagent

注意：
1.温度过低时，溶液中如果有盐析，需要保温使其溶解后使用。
2.BSA使用前，需要用水稀释到浓度为0.05mg/ml。
原理：
蛋白质中的酪氨酸残基与Folin-Ciocalteu酚试剂反应形成的有颜色的复合物，比较与已知蛋白质标准BSA形成的颜色从而确定未知蛋白质的含量。
注意：
1.该方法检测的蛋白质浓度范围1ug-50ug/ml。
2.Folin-Ciocalteu酚试剂的稳定期至少1年，CTC Solution稳定期为六个月。使用前根据需要的量取等体积的Solution CTC和Solution SoSDS混匀后，得到CTC Working Solution.混合后的必须在24小时内用完。。
3.由于Lowry法测定的是蛋白质中酪氨酸残基，对于那些酪氨酸残基数高于或低于BSA,其测定的蛋白质含量将偏低或偏高。如果遇到该情况，需要采用BCA或Bradford法测定。
4.阅读测定方法后化学试剂对测定方法的影响。
测定方法（试管法）：

1.BSA标准品和样品的准备：样品用水或其他不干扰显色反应的缓冲配置，使待测定的浓度位于标准曲线的线性部分。每个反应准备3个平行测定。标准曲线一般5-6个点即可，根据样品的浓度确定各点的具体浓度。稀释BSA时,可以用水，最好采用与样品一致或近似的溶液。
2.标准BSA使用前，需要用水稀释到浓度为0.05mg/ml。可以在1.5ml Eppendorf管内做反应。在管壁上依次标上序列号，按下表所列在管内加BSA标准品和样品。注意：每次反应都需要做一个和未知样品溶液相同的空白对照。样品如果浓度高于50ug/ml,需要用水或合适的缓冲稀释，记录稀释的倍数。

未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数
3.用容量为0.5ml、光径为1cm的比色杯测定750nm的光吸收。注意：染料如果吸附到比色杯壁上，杯子可以用甲醇清洗。测定时，测定浓度由低到高，测定未知样品时需要将杯子清洗干净，空白先测定，然后样品。

4.标准曲线的绘制。注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得。如果是计算机绘制得曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
测定方法（96微孔板法）
1．  BSA标准品和样品的准备：样品用水或其他不干扰显色反应的缓冲配置，使待测定的浓度位于标准曲线的线性部分。每个反应准备3个平行测定。标准曲线一般5-6个点即可，根据样品的浓度确定各点的具体浓度。稀释BSA时,可以用水，最好采用与样品一致或近似的溶液。
2．  标准BSA使用前，需要用水稀释到浓度为0.05mg/ml。按下表所列在孔内加BSA标准品和样品。注意：每次反应都需要做一个和未知样品溶液相同的空白对照。样品如果浓度高于50ug/ml,需要用水或合适的缓冲稀释，记录稀释的倍数。

未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

3．  用酶标测试仪750nm测定光吸收。
4．  标准曲线的绘制。注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制得曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。注意：实际操作时不必每次都做标准曲线，可以做一两个标准样品，和标准曲线比较得出浓度系数。未知样品的实际浓度=从标准曲线中得到的浓度*浓度系数。
注意：
一、如果样品中含有影响测定的物质，按下法除去：
1．  用水将样品调到体积为200ml, 加入20ml 0.15%去氧胆酸钠，混匀，室温放置10分钟。
2．  加入20ml 72%的TCA,室温放置5分钟。
3．  3000X g离心15分钟，小心去除上清，用200ml水溶解。此时的样品可以用于测定。
二、常用化学试剂对Lowry法测定方法的影响
Glycin<100mM, HEPE<1mM,  Imidazole<25mM, NaCl<1M, Tris<10mM, NaPi<100mM, CHAPS<0.05%, NP40<0.02%, SDS<1%, Trition X-100<0.03%, Tween<0.05%,EDTA<1mM, EGTA<1mM, Glucose<100mM, 2-Mercaptoethanol<1mM, Sodium Sitrate<100mM, Urea<3M, NaOH<100mM, PMSF<1mM, Sucrose<7%, Methanol<10%,DMSO<10%, Ethanol<10%, DMF<10%, Acetone<10%,Aprotinin<10mg.ml,.