高保真PCR扩增试剂盒 K383/K384

Quick DNA Amplification Kit

产品编号：E2300
试剂盒组成：

产品说明：高温嗜热Taq DNA聚合酶主要用于对保真度要求不高的DNA扩增，是许多PCR诊断试剂盒的重要组成部分。Taq DNA聚合酶从5'-3'端合成DNA，具有很强的DNA聚合能力，其DNA延伸的速度是已知高温嗜热DNA聚合酶中最高的。Taq DNA聚合酶无3'-5'端外切酶活性, DNA扩增时没有校正功能。对于高保真扩增，请选用BBST生产的真正的高保真DNA聚合酶，Pfu DNA 聚合酶 (产品编号E2000); 如果用于长链PCR扩增，可选用BBST的SuperTaq(产品编号E2400)或者Taq Plus DNA 聚合酶。 
反应缓冲液：
Ø  Taq DNA Pol. Buffer（Mg free）: 100 mM KCl, 80 mM (NH4)2SO4, 100 mM Tris-HCl, pH9.0, 0.5% NP-40。
Ø  Taq DNA Pol. Buffer (w/ Mg）: 100 mM KCl, 80 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgCl2,  100 mM Tris-HCl, pH9.0, 0.5% NP-40。
Ø  MgCl2：25 mM
质量控制：经过检测无外源核酸酶活性；SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无外源DNA; 能从50ng lambda 模板中特异性扩增出1kb 和2.2kb 的单拷贝基因。
储存条件：Taq DNA聚合酶成品保存于50 mM Tris-HCl, pH8.2, 0.1 mM EDTA, 0.1% Tween 20, 0.1% NP-40, 1mM DTT 和50% glycerol，-20°C,一年以上。
主要应用：
Ø   PCR方法扩增基因。
Ø   对DNA 片段进行放射性同位素，生物素等标记。
Ø   用于构建PCR诊断试剂盒。
Ø   基因T-A 克隆。

度65-75℃；dNTP的工作浓度为100-300mM, 最佳Mg2+浓度为 1.5-3.0 mM, 最佳pH为8.1-9.2；供应浓度为2.5-5U/ml；-20℃保存至少一年。
使用方法：
一般原则：DNA扩增（PCR）时，50ml标准反应体系需Taq DNA聚合酶2.5 U, 模板10ng-500ng，Mg2+浓度为 1.5-3.0 mM, dNTP的工作浓度为100-300mM, 循环次数根据模板的特性，通常在20-35个循环。其它参数设定参照Taq主要技术参数。
以下方法仅仅供参考：
1) 按下表中所列次序在冰上在0.2或0.5ml超薄PCR管中混合有关试剂

2) 混匀后，加入50ml矿物油。
3) 按下表的条件立即进行PCR。

注意事项：

(a) 退火温度取决与引物的Tm值，通常比Tm值低3-5°C左右。
(b) 对于长链DNA片段的扩增，使用纯度高，片段完整的DNA模板。
(c) 从临床样品中抽提得到的模板中，常常含有未知的PCR扩增抑制剂，摸板的质量常常是决定实验成败的关键。
(d) 引物设计时要避免自身形成二级结构和引物二聚体，长度为18-34个碱基，使引物的Tm值在52-68°C之间。目的是提高反应的特异性，降低短的非特异性产物的形成。
(e) 模板变性时，除了GC含量很高的模板外，92-94°C 30秒已足够。模板长时间处于高温环境，将会发生去嘌呤和部分降解。
(f) 如果扩增不理想，可将Mg2+在原有浓度的基础上再提高0.2 mM.
(g) cDNA作为模板时，Mg2+的终浓度为3.0mM, 4xdNTP的浓度为0.5mM比较合适.
(h) 除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：
Ø   模板太多或太少
Ø   样品中存在Mg2+ 络合剂, 导致Mg2+实际浓度过低
Ø   PCR仪温度不准
Ø   临床来源的样品中含有未知的Taq酶抑制剂
Ø   引物部分降解
Ø   dNTP部分降解