Go3SL离心式高纯质粒大量抽提试剂盒 K2410HL/2420HL/2430HL

3SM HighPure Plasmid Midi-prep Kit V1.2

试剂盒组成：

注：(a)Solution I内含RNase A，每次实验结束后，4°C保存。
(b)温度低时，Solution II有白色沉淀，水浴（不要超过37C）保温溶解后使用。
(c)首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入50 ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。
按下面提供的从细菌中抽提质粒的方法，从含pUC19质粒的DH5a细胞中抽提pUC19。用Agarose电泳和EcoR I, Hind III酶切检查质粒的质量。3SM柱子DNA吸附能力大于250ug。
用户需要准备的仪器：
         高速离心机带有50ml转子及离心管，水平转子为佳！！

实验操作步骤
1.将过夜培养内含高拷贝质粒的细菌25-50ml，或内含低拷贝质粒50-100ml细菌, 5000转/分, 离心10分钟，彻底去除上清。
2.加入1.5 ml Solution I，用枪头或振荡器充分悬浮细菌。
3.加入3 ml Solution II，立即上下颠倒5－10次，使细菌裂解，室温放置至溶液呈透明状。注意：不能用振荡器混，也不能用力混，否则会出现Genomic DNA污染。
4.加入6 ml Solution III，立即上下颠倒5－10次，使之充分中和, 室温放置5分钟。注意：步骤2和3在冰上操作效果更佳。注意：不能用振荡器混，也不能用力混，否则会出现Genomic DNA污染。
5.12,000 x g高速离心10分钟（速度高些更好，取决于离心机和离心管的类型）。
6.将3SM柱放入50ml收集管，将步骤5中的部分上清转移到3SM柱中；如离心后溶液表面没有漂浮物，上清可以直接倒入3SM柱。室温放置5分钟； 12000x g离心2分钟。注意：转移上清时不要吸取沉淀，否则会出现Genomic DNA和蛋白质污染。
7.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution I 到3SM柱，12000x g离心2分钟。
8.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution II 到3SM柱，12000x g离心2分钟。
9.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution 到3SM柱，12000x g离心2分钟。(Wash Solution中需要加入50ml乙醇)。
10.重复步骤9一次。
11.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，12000转/分室温离心2分钟。
12.将3SM柱放入干净的50ml的离心管中，加1000-1500ml TE室温下放置2分钟，12000x g离心2分钟。