3S柱式酵母基因组DNA 小量抽提试剂盒 K231/232

3S Spin Yeast Genomic DNA Isolation Kit V3.0

试剂盒组成：

、

注：
(a)首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入50ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。
(b)Proteinase K使用前加入75µl H2O, 4℃保存备用。不得Proteinase K直接加入到Digestion Buffer中，以免酶失活。

(c)除了试剂盒提供的试剂外，还需要准备液氮，碾钵，小型台式高速离心机，无水酒精等试剂和材料。

基本原理：
    该试剂盒的核心是能特异吸附DNA的3S柱。3S是一种能放入普通1.5ml和2.0ml eppendorf管中的离心式小柱，柱子的底部有一层由SNBC研制的惰性大分子材料，它能由选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。制备基因组DNA时，首先根据用石英沙和液氮碾磨，后用Proteinase K和去污剂裂解组织和细胞，释放出基因组DNA。3S用于吸附基因组DNA, 经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用TE ,Elution Buffer或者水洗脱。
DNA抽提方法：
1.收集酵母细胞（107）, 将细胞转移到碾钵中，加入300mg左右的石英沙，加入液氮碾磨，中途加入液氮，样品保持处于冷冻状态。
2.将样品转移到2ml离心管中，加入800µl Digestion Solution, 混匀,室温静置1-2分钟沉淀石英沙。
3.将上清400ul转移到干净的离心管中; 加入3ul Proteinase K，混匀，55°C保温60分钟。注意：应按次序加入，不得将Proteinase K先加入到Digestion Solution，再加到样品中。在按要求处理的样品中加入3ul Proteinase K，混匀，55°C保温10-60分钟。
4.高速室温12000转/分离心5分钟，将上清转移到1.5ml无菌离心管中，加入300ul Solution B, 混匀。
5.将样品全部转移到3S柱，柱子放入2.0 ml Collection Tube，盖上离心管盖(盖子也可以不盖，但是如果您同时有很多样品，担心混淆或弄翻溶液，建议您盖上盖子)。转移时用1ml Tip头取样品。
6.用台式离心机，12,000转/分，室温离心1分钟。
7.取下3S柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一根离心管中，加入500µl Wash Solution, 12,000转/分，室温离心1分钟。
8.重复步骤7一次。
9.取下3S柱，弃去离心管中的全部废液。将柱子放回同一根离心管中，10,000转/分，室温离心２分钟，以除去残留的Wash Solution。

10.在柱子中央加入100µl TE, 将柱子放入新的干净1.5 ml或２.0ml离心管中，室温或37-55°C放置２分钟。12,000转/分，室温离心1分钟。收集管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可以4°C或-20°C保存。