Go3S柱离心式质粒小量抽提试剂盒V3.1 K1910/1920/1930
CAT# |
SIZE |
PRICE（￥） |
K1910 |
50 |
200 |
K1920 |
100 |
350 |
K1930 |
250 |
680 |
改进型质粒抽提试剂盒Version3.1，不同于以往的Version 3.0，
实验前请务必仔细阅读操作步骤，注意改动之处。
试剂盒组成：
Components and Size |
K1910 (50次) |
K1920 (100次) |
K1930 (250次) |
Solution I(a) |
5 ml |
10 ml |
25 ml |
Solution II(b) |
10 ml |
20 ml |
50 ml |
Solution III |
20 ml |
40 ml |
2X50ml |
Wash Solution(c) |
22 ml |
2x22 ml |
5x22ml |
TE(d) |
5 ml |
10 ml |
40 ml |
3S Column |
50支 |
100支 |
250支 |
Collection tube |
50支 |
100支 |
250根 |
说明书 |
1份 |
1份 |
1份 |
注：
a)Solution I内含RNase A, 每次实验结束后，4°C保存。
b)温度低时，Solution II有白色沉淀析出，37度以下保温溶解，摇匀后使用。
c)首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入50ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖旋紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。
d)TE pH8.0或者水均可以用于洗脱，但是用水洗脱DNA，效率通常要低一些。抽提测序用质粒需要用水洗脱。
主要特点：
采用改良的碱裂解方法，质量稳定，重复性好。
经济快速，每个抽提可以在20分钟内完成。
无需酚抽提，无需乙醇沉淀，无需CsCl离心。
质粒纯度高，洗脱体积小，适合于DNA全自动荧光测序。
实验操作步骤（从细菌中抽提质粒）
1.将过夜培养的2ml细菌，测序用质粒抽提请用5ml细胞，高速离心1分钟，彻底去除上清。
3.加入200ml Solution II，立即上下颠倒或用手指弹管底，使细菌裂解，室温放置(2分钟左右)至溶液变成澄清。
4.加入400 ml Solution III，立即上下颠倒5－10次，使之充分中和，室温放置2分钟。注意：步骤2和3在冰上操作效果更佳。
5.高速离心，15,000转/分钟，10分钟。无需低温离心。注意：提高离心速度，使沉淀更加紧密，步骤6操作取上清更为方便。
6.取出2ml样品收集管和3S柱，在管壁标上样品号，将步骤5中的上清全部转移到（吸或倒入）3S柱子里。盖上离心管盖子(盖子也可以不盖，但是如果您同时有很多样品，担心混淆或弄翻溶液，建议您盖上盖子)，室温放置2分钟（室温放置时间不重要，可长可短）；用台式离心机室温高速（12,000转/分钟）离心1分钟。注意：转移上清时不要吸取沉淀，否则会出现Genomic DNA和蛋白质污染。离心管盖子盖上时，柱子内压的增加，可能会使部分溶液从柱子底部流出，为正常现象。
7.取下3S柱，弃去掉收集管中的废液，将3S柱放入同一支收集管中，吸取700ml Wash Solution到3S柱，高速离心1分钟。
8.重复步骤7一次。
9.取下3S柱，弃去掉收集管中的废液，将3S柱放入同一支收集管中，高速离心2分钟。
10.将3S柱放入干净的1.5ml的离心管中，在3S柱子膜中央加50ml TE或水，不要盖上离心管盖，室温下放置2分钟；盖上离心管盖，室温高速离心1分钟。注意：将TE或水预热到50℃左右可以提高洗脱效率。测序用质粒用30ml预热的水洗脱，浓度一般满足国内测序要求。 11.洗脱的质粒可以立即用于各种分子生物学操作或-20℃保存备用。1 ml过夜培养细胞，质粒如果用50ml水洗脱，通常情况下可以取10ml洗脱液做Agarose电泳或酶切分析。
