EZ-Resin质粒小量抽提试剂盒 K171/172/173

EZ-Resin Plasmid Miniprep Kit

试剂盒组成:

a.  Solution I内含RNase A，每次实验结束后，4°C保存。
b.  温度低时, Solution II有白色沉淀析出，37C以下保温溶解，摇匀后使用。
c.  EZ-Resin Suspension在每次使用前一定要充分混匀后，吸取溶液。
d.  首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入50 ml无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。
主要用途：
1. 从细菌中快速抽提质粒，筛选出重组克隆。
2. 抽提的质粒可以用于限制酶酶切，转化等常规实验。

质粒抽提步骤

1. 准备细胞。对于高拷贝质粒2ml 过夜细菌细胞即可；对于低拷贝数的质粒，通常则需要5ml过夜培养细胞。培养时加入合适的筛选标记。
2. 将细胞转移到1.5ml eppendorf 管，离心30秒（10,000´g），倒掉上清液。将细胞用100ml Solution I 悬浮起来。
3. 加入200ml Solution II, 盖上离心管盖，小心上下颠倒几次，室温放置3分钟。
4. 加入150ml Solution III，小心上下颠倒几次，室温放置3分钟。
5. 12,000rpm室温离心 5分钟。小心将上清液转移到1.5ml eppendorf管中。加入300ml EZ-Resin Suspension,混匀，室温放置2分钟，间或混匀几次。EZ-Resin Suspensin加入前一定要充分混匀后吸取。
6. 室温离心 (12,000 rpm) 30秒。小心移去溶液，不要移走EZ-Resin。
7. 加入600ml Wash Solution, 用手指弹起EZ-Resin 室温离心60秒。
首次使用Wash Solution，按要求加入无水乙醇。
8. 小心移去溶液，室温离心 (12,000 rpm) 30秒，用Tip头移去多余的溶液，同时用枪头将Beads搅散，便于干燥。管子倒置，室温放置5-10分钟。
9. 用20-50ml TE或者水将EZ-Resin悬浮起来，室温放置2分钟，间或混匀几次。室温离心1分钟，小心将洗脱液移至干净的eppendorf 管中。测序样品用20ml水洗脱。